Человеческий гема- свободный RUO ELISA Assay Kit RESEARCH Использовать только для медицинской диагностики

Цель:

Этот комплект позволяет определить концентрации свободного гема в цельной крови.

Принцип анализа

Комплект анализирует уровень человеческого свободного гема в образце, использует очищенное человеческое свободное гемовое антитело для покрытия микротитровых скважин, делает твердофазные антитела, затем добавляет свободный гем в скважины,Комбинированное свободное гемовое антитело с маркировкой HRP, превращается в антитело-антиген-энзим-антитело комплекс, после мытья полностью, добавить раствор TMB субстрата, TMB субстрата становится синего цвета при HRP фермент-катализируемый,Реакция заканчивается добавлением раствора серной кислоты и изменение цвета измеряется спектрофотометрически на длине волны 450 нмЗатем концентрация свободного гема человека в образцах определяется путем сравнения ОД образцов со стандартной кривой.

Технические параметры:

Материалы, поставляемые с набором:

Требования к образцам

• Если это невозможно, то следует проводить эксперимент как можно скорее после сбора образца и согласно соответствующей литературе.образец может храниться при температуре -20 °C для сохраненияИзбегайте повторных циклов заморозки и размораживания.
• Невозможно обнаружить образцы, содержащие NaN3, потому что NaN3 ингибирует HRP актив.

Процедура оценки

• Разбавлять и добавлять образец:Разбавлять Стандарт первоначальной плотности в следующей таблице:

2.добавить образец:Установите пустые скважины отдельно (пустые скважины сравнения не добавляют образец и реагент HRP-Conjugate, иначе каждая операция на каждом этапе одинакова).Добавить 50μl стандартного в Microelisa стрипплетДобавьте 40μl разбавленного образца в скважину пробы, затем добавьте 10μl пробы (конечная разбавленность пробы составляет 5 раз), добавьте пробу в скважины, не прикасайтесь к стене скважины, насколько это возможно, и мягко смешайте.

3.Инкубировать: после закрытия пластины мембраной закрытия пластины инкубировать в течение 30 минут при температуре 37°C.

4.Конфигурировать жидкость: 30-кратный (или 20-кратный) раствор для промывки, разбавленный 30-кратным (или 20-кратным) разрядом с дистиллированной водой и резервом.

5.мытье:открыть закрывающую мембрану, выбросить жидкость, высушить по поводу, добавить стиральный буфер в каждую скважину, еще на 30 минут, затем слить, повторить 5 раз, высушить потуплением.

6.добавить фермент:добавить 50μl реактива HRP-Conjugate в каждую скважину, кроме пустой скважины.

7. инкубировать: Операция с 3.

8.мытье: работа с 5.

9.цвет:добавлять хромогенный раствор A 50ul и хромогенный раствор B 50ul в каждую скважину, избегать консервирования светом в течение 10 минут при 37°C

10.Остановить реакцию: Добавить Stop Solution50μl в каждую скважину, остановить реакцию ((синий цвет меняется на желтый цвет).

11.анализ: возьмите пустую скважину с нулем, прочитайте поглощение при 450 нм после добавления стоп раствора и в течение 15 мин.

Вычислить

Возьмите стандартную плотность как горизонтальную, значение OD для вертикальной, нарисуйте стандартную кривую на графической бумаге,Найти соответствующую плотность в соответствии с выборкой значение OD по кривой выборки, умноженное на кратное разбавления, или вычислить уравнение регрессии по прямой линии стандартной кривой со стандартной плотностью и значением OD, с выборочным значением OD в уравнении,рассчитать плотность пробы, умноженное на коэффициент разведения, получается фактическая плотность образца.