Набор для ИФА-анализа человеческого иризина

НАЗНАЧЕНИЕ

Этот набор позволяет определять концентрации иризина в сыворотке, плазме и других биологических жидкостях человека.

Процедура анализа

1. Разбавление и добавление образца: Разбавьте стандарт исходной плотности в соответствии со следующей таблицей:

2. Добавление образца: Отдельно установите контрольные лунки (в контрольные лунки сравнения не добавляют образец и реагент HRP-конъюгата, остальные этапы выполняются одинаково). Лунка для образца. Добавьте 50 мкл стандарта в микропланшет, добавьте 40 мкл разбавленного образца в лунку для образца, затем добавьте 10 мкл образца (окончательное разбавление образца в 5 раз), добавьте образец в лунки, не касаясь стенок лунок, насколько это возможно, и аккуратно перемешайте.

3. Инкубация: После закрытия планшета мембраной для закрытия, инкубируйте в течение 30 минут при 37℃.

4. Приготовление раствора: 30-кратный (или 20-кратный) промывочный раствор разбавьте в 30 раз (или 20 раз) дистиллированной водой и отложите.

5. Промывка: Откройте мембрану для закрытия, удалите жидкость, высушите путем встряхивания, добавьте промывочный буфер в каждую лунку, выдержите в течение 30 секунд, затем слейте, повторите 5 раз, высушите путем промокания.

6. Добавление фермента: Добавьте 50 мкл реагента HRP-конъюгата в каждую лунку, за исключением контрольной лунки.

7. Инкубация: Операция с пунктом 3.

8. Промывка: Операция с пунктом 5.

9. Окрашивание: Добавьте 50 мкл раствора хромогена А и 50 мкл раствора хромогена В в каждую лунку, избегайте воздействия света в течение 10 минут при 37℃

10. Остановка реакции: Добавьте 50 мкл стоп-раствора в каждую лунку, остановите реакцию (синий цвет меняется на желтый).

11. Анализ: Возьмите контрольную лунку за ноль, измерьте абсорбцию при 450 нм после добавления стоп-раствора и в течение 15 минут.

Требования к образцам

1. Извлеките образец как можно скорее после сбора, и в соответствии с соответствующей литературой, и проведите эксперимент как можно скорее после извлечения. Если это невозможно, образец можно хранить при температуре -20 ℃, избегайте циклов замораживания-оттаивания.

2. Нельзя определять образцы, содержащие NaN3, поскольку NaN3 ингибирует активность HRP.

3. Извлеките образец как можно скорее после сбора, и в соответствии с соответствующей литературой, и проведите эксперимент как можно скорее после извлечения. Если это невозможно, образец можно хранить при температуре -20 ℃, избегайте циклов замораживания-оттаивания.

4. Нельзя определять образцы, содержащие NaN3, поскольку NaN3 ингибирует активность HRP.

Важные примечания

• Набор, извлеченный из холодильника, следует сбалансировать в течение 15-30 минут при комнатной температуре, планшеты ИФА, покрытые, если не использованы после открытия, следует хранить в герметичном пакете.
• Промывочный буфер будет кристаллизоваться, его можно нагреть в воде, что поможет растворению при разбавлении. Промывка не влияет на результат.
• Добавляйте образец с помощью пробоотборника на каждом этапе и часто проверяйте его точность, избегайте ошибок в эксперименте. Добавляйте образец в течение 5 минут, если количество образцов велико, рекомендуется использовать Volley.
• Если содержание тестируемого материала чрезмерно высокое (ОП образца больше, чем в первой стандартной лунке), пожалуйста, разбавьте образец (n-кратно), пожалуйста, разбавьте и умножьте на коэффициент разбавления. (×n×5).
• Мембрана для закрытия предназначена только для одноразового использования, чтобы избежать перекрестного загрязнения.
• Субстрат следует хранить в защищенном от света месте.
• Пожалуйста, строго следуйте инструкции по применению, определение результатов теста должно основываться на показаниях ридера микропланшетов.
• Все образцы, промывочный буфер и каждый вид отходов следует обрабатывать в соответствии с процедурой работы с инфекционным материалом.
• Не смешивайте реагенты из разных партий.