Наборы теста антитела анти- набора анти- TPO теста Elisa пероксидазы тиреоида

Анти--TPO набор Elisa пероксидазы Анти--тиреоида

1. Предполагаемое использование

Immunoassay для in vitro количественного определения антител к пероксидазе тиреоида в человеческой сыворотке. Анти- определение ‐ TPO использовано как помощь в диагнозе аутоиммунных заболеваний тиреоида.

2. Сводка

• Пероксидаза ‐ тиреоида специфическая (TPO) присутствует на микросомах thyrocytes и выражена на своей верхушечной поверхности клетки. В синергии с thyroglobulin (Tg) этот энзим имеет необходимую функцию в iodination l тирозина ‐ и химического соединения приводя mono ‐ и iodotyrosine di ‐ для того чтобы сформировать инкрети тиреоида T4, T3, и fT3.
• TPO потенциальное autoantigen. Повышенные титры сыворотки антител к TPO найдены в нескольких форм тиреоидита причиненных аутоиммунитетом. Тишина часто находила термина «микросомое антитело» возникает от времени когда TPO пока не было определено как антиген в аутоиммунитете причиненном микросомами. В клиническом чувстве ‐ TPO 2 терминам анти- и микросомое антитело можно использовать синонимично; разницы, однако, относительно методов теста.
• Высокие анти- титры ‐ TPO найдены в до 90% из пациентов с тиреоидитом хронического Hashimoto. В заболевании могил, 70% из пациентов имеют повышенный титр. Хотя чувствительность процедуры может быть увеличена одновременно определять другие антитела тиреоида (анти- ‐ Tg, ‐ TSH антитело ‐ приемного устройства - TRAb), отрицательное обнаружение не управляет вне возможностью аутоиммунной болезни. Величина титра антитела не сопоставляет с клинической работой заболевания. Первоначально повышенные титры могут стать отрицательными после длинномерных периодов болезни или во время затихания. Если антитела снова появляются следовать затихание, то рецидив вероятен.
• Тогда как обычные микросомые тесты антитела используют unpurified микросомы как подготовка антигена, анти- тесты ‐ TPO используют очищенную пероксидазу. 2 процедуры соответствующего характеристики рабочого по отоношению к клинической чувствительности, но лучшее ‐ серии к последовательности серии ‐ и более высокой клинической характерности можно предполагать от анти- ‐ TPO испытывает должное к высококачественному антигена использовало. Энзим соединил assays иммуносорбента использует человеческие антитела IgG антигена и кролика анти--человеческие (анти--IgG).

3. Принцип теста

Косвенный метод, полная продолжительность assay: 70 минут.

Анти--TPO ELISA использует твердый участок, косвенный метод ELISA для обнаружения антител к TPO в процедуре по инкубации 2-шага. Прокладки microwell полистироля пре- покрытые с сильно immunoreactive человеческими антигенами TPO. Во время первого шага инкубации, анти--TPO специфические антитела, если присутствующий, будут прыгнуты к твердому участку пре-покрыли антигены TPO. Колодцы помыты для того чтобы извлечь unbound протеины сыворотки, и добавлены антитела IgG кролика анти--человеческие (анти--IgG) проспряганные к пероксидазе хрена энзима (конъюгату HRP-). Во время второго шага инкубации, эти HRP-проспряганные антитела будут прыгнуты ко всем комплексам антиген-антитела (IgG) ранее сформировали и unbound HRP-конъюгат после этого извлекается путем мыть. Решения хромогена содержа Tetramethylbenzidine (TMB) и перекись мочевины добавлены к колодцам и в присутсвии антиген-антител-анти--IgG immunocomplex (HRP), бесцветные хромогены hydrolyzed связанным конъюгатом HRP к цвета сине продукту. Голубой цвет поворачивает желтым после останавливать реакцию с масляной серной кислотой.

Количество интенсивности цвета можно измерить и оно пропорционально к количеству антитела захваченному в колодцах, и к количеству антитела в образце соответственно.

4. Материалы реагентов обеспечили

• Покрытое Microplate, 8 x 12 прокладок, 96 колодцев. Пре-покрытый с человеческим антигеном TPO.

• Калибраторы, 6 пробирок, 1 mL каждое, готовых для использования; Концентрация: 0 (a), 25 (b), 50 (c), 100 (d), 250 (e) и 500 (f) IU/mL.

• Конъюгат энзима, 1 пробирка, 11,0 mL HRP (пероксидазы хрена) обозначил кролика анти- человеческими антителами IgG (анти--IgG) в буфере Tris-NaCl содержа BSA (альбумин глупой сыворотки). Содержит 0,1% предохранителя ProClin300.

• Разжижитель сыворотки: 1 пробирка, 11mL. Содержание солей буфера и краски

• Концентрат моющего раствора, 1 пробирка, 25 ml (40X сконцентрировало), моющий раствор PBS-твена.

• Субстрат, 1 пробирка, 11ml, готовое для использования, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Остановите решение, 1 пробирку, 6,0 ml 1 mol/l масляной серной кислоты.

• IFU, 1 экземпляр.

• Крышка плиты: 2 части.

Необходимы материалы (но не обеспеченный)

• Читатель Microplate с возможностью вещество-поглотителя длины волны 450nm и 620nm.

• Шайба Microplate.

• Инкубатор.

• Шейкер плиты.

• Микропипетки и multichannel микропипетки поставляя 50µl с точностью лучше чем 1,5%.

• Бумага вещество-поглотителя.

• Дистиллированная вода

5. Методика проверки

• Используйте только число требуемых колодцев и форматируйте колодцы microplate для каждых калибратора и образца, который нужно assayed.

• Добавьте µL 100 калибраторов к каждому колодцу.

• Добавьте µL 100 разжижителя образца (зеленого цвета) к каждому колодцу за исключением Калибратор-колодцев.

• Добавьте µL 10 образца к каждому колодцу разжижителя образца (ПРИМЕЧАНИЮ: Реагенты в Wells повернут голубой цвет от зеленого цвета), тогда трясут 30 секунд.

• Покройте плиту с крышкой плиты и инкубируйте на °C 37 на 30 минут.

• Сбросьте содержание микро- плиты декантированием или устремленностью. Если сцеживающ, выстучайте и закрывайте сухой плиты с бумагой вещество-поглотителя.

• Добавьте µL 350 моющего раствора, сцедите (кран и помарка) или аспирируйте. Повторите 4 дополнительных времени для итога 5 мыть. В конце стирки, переверните плиту и выстучайте вне любой остаточный моющий раствор на бумагу вещество-поглотителя.

• Добавьте µL 100 конъюгата энзима,

• Покройте плиту с крышкой плиты и инкубируйте на °C 37 на 30 минут.

• Добавьте µL 350 моющего раствора, сцедите (кран и помарка) или аспирируйте. Повторите 4 дополнительных времени для итога 5 мыть. В конце стирки, переверните плиту и выстучайте вне любой остаточный моющий раствор на бумагу вещество-поглотителя.

• Добавьте µL 100 субстрата к каждому колодцу. Покройте и инкубируйте на температуре окружающей среды (18-25℃) в темноте для реакции на 10 минут. Не трясите плиту после добавления подсостояния.

• Добавьте µL 50 решения стопа к каждому колодцу.

• Трясите на 15-20 секунд для того чтобы смешать жидкость внутри колодцы. Важно обеспечить что голубые изменения цвета, который нужно пожелтеть совершенно.

• Прочитайте absorbance каждого колодца на 450 nm (используя 620 до 630 nm как длина волны ссылки для того чтобы уменьшить хорошие несовершенства) в микро- читателе плиты. Результаты должны быть прочитаны не позднее 30 минут добавления останавливают решение.