ПК набора 96 теста инкрети прокладки теста ISO13485 LH Elisa Luteinizing

Инкреть Luteinizing набора LH Elisa

1. Предполагаемое использование

Immunoassay для in vitro количественного определения luteinizing инкрети в человеческой сыворотке.

2. Сводка

• LH (luteinizing инкреть), вместе с FSH (инкретью стимулировать фолликула), принадлежит семье гонадотропного гормона. LH и FSH регулируют и простимулировать рост и функцию гонад (завязи и семенники) синергически. Как FSH, TSH и hCG, LH гликопротеид состоя из 2 субблоков (α- и β-цепи). (1, 2, 3) это proteohormone, которое состоит из 121 аминокислоты и 3 цепей сахара, имеет молекулярный вес 29500 daltons. В женщинах, действуют, что внутри цепь подбугорь-pituitary-завязи регулируя контролируют гонадотропные гормоны менструальный цикл.
• LH и FSH выпущены в ИМПах ульс от гонадотропных клеток anterior pituitary и пропуска через кровоток к завязям. Здесь гонадотропные гормоны стимулируют рост и созревание фолликула и следовательно биосинтеза эстрогенов и прогестеронов. Самая высокая LH-концентрация происходит во время пика средний-цикла и наводит овуляцию и образование luteum сборника, основного продукта секретирования чего прогестерон. В клетках Leydig семенников, LH стимулирует продукцию тестостерона. Определение концентрации LH использовано в разяснении дисфункций внутри система подбугорь-pituitary-гонад. Определение LH совместно с FSH использовано для следующих индикаций: врожденные заболевания с аберрациями хромосомы (например синдромом тернера), polycystic завязями (PCO), уточняя причины аменореи, менопаузальный синдром, и заподозренную недостаточность клетки Leydig. (1, 4, 5)

3. Принцип теста

Принцип сэндвича. Полная продолжительность assay: 80 минут.

• Образец, Анти--LH покрыл microwells и Анти--LH обозначенный энзимом совмещен.

• Во время инкубации, LH представляет в образце позволен для того чтобы прореагировать

одновременно с 2 антителами, приводящ в молекулах LH быть

прослоенный между твердым участком и энзим-соединенными антителами.

• После стирки, комплекс произведен между твердым участком, LH внутри образец и энзим-соединенными антителами иммунологическими реакциями.

• Решение субстрата после этого добавлено и катализировано этим комплексом, приводящ в хромогенной реакции. Приводя хромогенная реакция измерена как absorbance.

• Absorbance пропорциональн к количеству LH в образце.

Реагенты

Обеспеченные материалы

• Покрытое Microplate, 8 x 12 прокладок, 96 колодцев, пре-покрытых с мышью моноклональной

Анти--LH.

• Калибраторы, 6 пробирок, 1 ml каждое, готовых для использования; Концентрация: 0 (a), 5 (b), 20 (c), 50 (d), 100 (e) и 200 (f) mIU/mL.

• Конъюгат энзима, 1 пробирка, 11 mL HRP (пероксидазы хрена) обозначил мышь моноклональным Анти--LH в буфере Tris-NaCl содержа BSA (альбумин глупой сыворотки). Содержит 0,1% предохранителя ProClin300.

• Субстрат, 1 пробирка, 11ml, готовое для использования, (tetramethylbenzidine) TMB.

• Остановите решение, 1 пробирку, 6,0 ml 1 mol/L масляной серной кислоты.

• Концентрат моющего раствора, 1 пробирка, 25 mL (40X сконцентрировало), PBS-твен

моющий раствор.

• IFU, 1 экземпляр.

• Крышка плиты: 1 часть.

Необходимы материалы (но не обеспеченный)

• Читатель Microplate с возможностью вещество-поглотителя длины волны 450nm и 620nm.

• Шайба Microplate.

• Инкубатор

4. Методика проверки

• Используйте только число требуемых колодцев и форматируйте колодцы microplates для

каждые калибратор и образец, который нужно assayed.

• Добавьте μL 25 калибраторов или образцов к каждому колодцу.

• Добавьте μL 100 конъюгата энзима к каждому колодцу.

• Трясите microplate нежно на 30 секунд для того чтобы смешать.

• Покройте плиту с крышкой плиты и инкубируйте на °C 37 на 60 минут.

• Сбросьте содержание микро- плиты декантированием или устремленностью. Если

сцеживающ, выстучайте и закрывайте сухой плиты с бумагой вещество-поглотителя.

• Добавьте μL 350 моющего раствора, сцедите (кран и помарка) или аспирируйте. Повторите 4 дополнительных времени для итога 5 мыть. Автоматизированную шайбу прокладки microplate можно использовать. В конце стирки, переверните плиту и выстучайте вне любой остаточный моющий раствор на бумагу вещество-поглотителя.

• Добавьте μL 100 субстрата к каждому колодцу.

• Инкубируйте на температуре окружающей среды (18-25℃) в темноте для реакции на 20 минут. Не трясите плиту после добавления подсостояния.

• Добавьте μl 50 решения стопа к каждому колодцу.

• Трясите на 15-20 секунд для того чтобы смешать жидкость внутри колодцы. Важно к

обеспечьте что голубые изменения цвета для того чтобы пожелтеть совершенно.

• Прочитайте absorbance каждого колодца на 450 nm (используя 620 до 630 nm как

длина волны ссылки для того чтобы уменьшить хорошие несовершенства) в микро- читателе плиты.